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一起来看看细胞中线粒体活体染色实验相关知识吧！

2023-10-16 17:38:24

简介

细胞在整个生命过程中进行着多种生命活动，它们都是通过细胞中各种固有的结构及其成分来实现的，真实地反映这些结构和成分在不同细胞中的特点对了解细胞生命过程具有重要意义。活体染色即是一种能够反映细胞活性状态下特征的方法，它是利用某些无毒或毒性较小的染色剂使细胞内某些结构或组分以天然状态显示出来的一种染色方法。

原理

细胞中线粒体活体染色实验的基本原理是用于活体染色的染色剂应具有专一性，不影响或较少影响细胞的正常生命活动。活体染色通常用于显示细胞中某一特定结构，如线粒体、细胞核等，也可判定细胞存活情况，常用的染料有詹纳斯绿、中性红等。詹纳斯绿B（Janus green B）是线粒体的专一活体染色剂，呈碱性，具有脂溶性，能穿过细胞膜而进入细胞，并通过其结构中带有正电荷的染色基团结合到负电荷的线粒体内膜上。线粒体是细胞内进行能量代谢的重要场所，内含多种与能量代谢有关的酶类，其中内膜上的细胞色素氧化酶可使结合的詹纳斯绿保持氧化状态而呈现蓝色，而在周围的细胞质中染料被还原成为无色。

材料与仪器

器材：
解剖器材、解剖盘、平皿、载玻片、盖片、吸管、吸水滤纸、注射器、普通光学显微镜、兔子。

试剂：
①0.9％Ringer 液（哺乳动物用）（氯化钠，0.9 g ；氯化钾，0.042 g ；氯化钙，0.025 g ；蒸馏水，100 mL ）;
②1／300詹纳斯绿 B（詹纳斯绿 B 1.0 g ，Ringer 液100 mL ，装入棕色瓶保存，最好临用前现配）;

步骤

细胞中线粒体活体染色实验的基本过程可分为如下几步：

A.取兔子1 只，以空气栓塞法处死，将其置于解剖盘中，迅速打开腹腔，取兔肝边缘较薄的肝组织一块（2～3 mm3 ）。

B.将组织块置于平皿中，加入0.9％Ringer 液清洗3 次，去除血液。

C.用滤纸吸去 Ringer 液。

D.加入1／300詹纳斯绿 B 染液，染色30 min 。

E.将组织块移至载玻片上，用镊子将其拉碎后，去除组织块，留下细胞。

F.滴1 滴 Ringer 液，盖上盖片，用滤纸从盖片侧面吸取多余液体。

G.镜下观察。
注意事项

1.因为本实验是活体染色，在实验的整个过程中，应注意保持标本的活体状态，当细胞死亡或开始死亡时，随着酶的失活，细胞质和细胞核也被染色。在取材时，要做到准确、快速；在染色时，要让组织块表面暴露在染液外面，使细胞内线粒体的酶可充分进行氧化作用，保持染料的氧化状态，发挥染色效能。

2.詹纳斯绿有微弱毒性，染色时间过长，有可能导致线粒体形成空泡，在操作中应加以注意。

来源：丁香实验，如有侵权请联系删除！

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