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如何判断qPCR数据能不能用?

大家好,今天聊下做的aPCR数据可以进行分析,能不能用这个问题,判断 qPCR 数据是否可用需要考虑以下几个方面:

1.扩增曲线:扩增曲线应该呈现出典型的 S 型曲线,且曲线应该平滑,没有明显的锯齿状或平台期。

2.阈值线:阈值(threshold)一般是基线的标准偏差的10倍。阈值线应该位于扩增曲线的指数增长期,且应该在曲线的中部,不应过高或过低。
3.CT 值:CT 值(循环阈值)是指扩增曲线达到阈值线所需的循环数。CT 值应该在合理的范围内,一般来说,CT 值应该在 15-35 之间。


4.内参基因:如果实验中使用了内参基因,内参基因的 CT 值应该稳定且在合理范围内。

5.重复性:qPCR 实验应该具有良好的重复性,即相同条件下重复实验得到的结果应该相似。

6.溶解曲线:单峰无杂峰,TM在75-90之间。

如果 qPCR 数据满足以上要求,则可以认为数据可用。如果数据存在异常或不符合要求,则需要进一步分析原因并采取相应的措施,如优化实验条件、重新实验等。

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