赛默飞带自动图像分析功能的流式细胞仪上新啦！
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流式细胞术（Flow cytometry，FCM）是对悬液中的单细胞或其他颗粒，通过检测标记的荧光信号，实现高速、逐一的细胞定量分析和分选的技术。作为一种新兴的生物学检测技术，由于其快速、多参数、高通量、自动化的技术优势，流式的应用领域越来越广泛，从传统的免疫学、血液学、肿瘤学等生命科学领域，到药物研发、细胞基因治疗、生物材料、海洋生物学、化妆品等领域都有广泛的应用前景。 虽然有这么多的优点，但经常做流式实验的研究人员也非常清楚，有时候流式实验结果具有一定的主观性，比如有些分群不清楚的设门、弱表达或连续表达指标的阴阳性群界限、死活细胞的区分、补偿调节合不合适等问题。
那么如何克服这么多的不确定性呢？ 图1. 自动图像分析参数。(A) 软件可以识别目的细胞或颗粒的边界及中心点。(B) 确定待测细胞的中心点有助于确定图像中细胞或颗粒的数量。(C) 数据分析前可以利用质控功能去掉图像中视野外的目的细胞。左图为目的细胞，右图为非目的细胞。(D) 利用图像衍生参数轻松区分样本中的单个细胞、黏连细胞和细胞团块。 下面以最简单的细胞凋亡实验为例，来验证带自动成像功能的Attune CytPix成像型流式细胞仪可以进行精确设门，并减少人为因素的影响，从而得到更准确的实验结果。
处于对数生长期的Jurkat细胞用10 uM顺铂处理4小时诱导凋亡，用Invitrogen Alexa Fluor 488 Annexin V, PI和 Hoechst 33342进行染色后，在带Invitrogen CytKick Max自动进样器的Attune CytPix成像型流式细胞仪进行上机检测，用100 ul/分钟的流速进行上样。每个样本收集30000个细胞和7000张图像，用Attune Cytometric软件的“Cells Full Resolution”模式分析所有图像结果。 图2. 利用自动图像分析功能减少设门时的主观性。传统流式细胞仪利用散射光参数排除细胞碎片和黏连体。(A) 顺铂诱导的Jurkat细胞用Annexin V、PI和Hoechst染色。软件对所有细胞进行分析，分别圈出有核细胞和单个细胞后统计凋亡细胞的比例。 (B) 利用图像衍生参数排除细胞碎片或凋亡小体后圈出>8 um的目的细胞，设为“SizeGate”门。“ParticleCount”参数“1”附近的标记为单个细胞，然后分析“AISinglets”门内的凋亡细胞，可以清晰地区分凋亡细胞、凋亡晚期/死细胞和活细胞。
图3. 自动图像分析功能提供一致的设门策略。(A) 在Hoechst/SSC-A点图中利用图像衍生参数区分凋亡小体和有核细胞。(B) 通过自动成像分析设门工具中的直径大小参数有效区分>8 um的目的细胞。
最后总结一下，本文提到的这款神器——Invitrogen Attune CytPix 成像型流式细胞仪：
Attune CytPix是在Attune NxT流式细胞仪的基础上增加了明场成像功能，既保留了传统流式高速、高参数、大数据分析的优势，又增加了明场观察细胞形态、活性等信息，在生命科学研究、细胞治疗和生物技术开发等领域都有广泛的应用前景。 声波聚焦技术，上样速度比传统流式细胞仪快10倍 高速成像和AI自动成像功能，6000张图片/秒 专利抗堵设计，大细胞、黏细胞轻松上样 可达4激光16个参数，配置灵活，可现场升级 具备细胞绝对计数功能，同时可配置流式自动化工作站
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