关于超净工作台里有没有必要用酒精灯,一直是许多科研者谈论的火热话题之一。
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部分人认为超净工作台里不需要放置酒精灯,大致会有如下一些观点:
现在绝大多数细胞培养使用的试剂瓶子,都是塑料制品,经不起灼烧,短暂的过火达不到高温,肯定没有局部消毒的效果,更别说灭菌了;
超净台内的气流本来就应该是无菌的,酒精灯的热气流会干扰通风的流动,反而影响超净台本身的层流除菌除尘效果;
所谓酒精灯周围是无菌区,是在没有超净台的时候,灼烧能产生上升气流,防止灰尘落入瓶口,但有超净台的时候就没有必要;
在正常情况下,快速操作比在酒精灯附近无菌区磨蹭效果更佳;
使用酒精灯增加了火灾的隐患;
某些有留学经历的,表示在美国细胞培养超净台里是没有酒精灯的;
无菌操作才是细胞培养的根本,而不是酒精灯提供的这点作用;
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但无论说一千道一万,
事实是国内绝大多数超净工作台里,
依然配有酒精灯。
少部分没有配置的,
最主要原因是考虑明火安全问题。
或者就是自己认错了台子,
没有分清楚生物安全柜和普通超净工作台。
生物安全柜是不需要也不可以放置明火酒精灯的。
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那么究竟超净台里配置酒精灯,是否多此一举?
回答这个问题之前,我想先举例外科手术室做类比:
轮转过外科的医学生,想必都对手术室的无菌条件和强调无菌意识的重要性印象深刻。
不论是普通消毒手术室,还是现代高级的层流手术室,都是一样强调无菌意识。
尽管手术室内使用紫外线消毒、手术台铺了很多无菌单,对双手依旧要求“上不过肩、下不及腰”。
尽管需要身穿无菌衣、戴无菌手套,对手卫生的洗手、消毒流程一样必不可少。
操作动作讲究柔和、有序进行,而不是一惊一乍、噼里啪啦。
要是你胆敢用戴着无菌手套的手去挠戴着无菌帽子的头,小心主任锤爆你的头!
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这些动作和行业规范,是为了不论是从理论上,还是从实际上尽最大程度地达到无菌条件。
国内超净工作台里放置酒精灯,就是在细胞培养过程中不论是从理论上,还是实际上的一种更高无菌条件的保证!
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理由如下:
无菌是分等级的,超净工作台一般可以达到局部百级,也就是指1立方米空气中的5微米以上的尘埃数不超过100,也不是完全无菌无尘,且紫外线台内不能100%的消灭微生物。而酒精灯周围10cm处可以形成一个天然无菌区,是对局部无菌环境的更进一步保障。
酒精灯有上升气流,可以使其附近大约10cm处的范围内,没有灰尘落下,开启的瓶盖放置在此区域,就算是暴露状态下,也不用太担心灰尘掉落的问题。
细胞培养的试剂,都不是一次就用完的,需要放置在非无菌环境的冰箱里保存,这过程难免会导致瓶身、瓶口附近附着细菌、灰尘。尽管带入超净台内都会用酒精喷洒,但酒精仍然无法完全灭菌和除尘。其实细菌自己是不会跑的(跑得太慢了),所以细菌的移动不是随着气流,就随着液流,我们适当灼烧瓶口等有液流的地方,使其干燥,就产生了相当于“局部固定”细菌或灰尘的作用,就减少了它们随液流扩散的可能性。
细胞培养过程,难免有些液体是用倾倒的方式丢弃,这时瓶口的残留流动液体就增加了污染的可能性,酒精灯可以使其干燥,原理同上。
一些原代细胞操作时,会用到一些金属器械,虽然我们是高压灭菌后才使用的,但是往往一次实验里,需要夹取不同部位和组织,间隔期间用酒精灼烧金属器械,可以干燥或者达到灭菌效果。
很多单位超净工作台,并没有定期检查维护(达不到国外发达国家的条件),最多也就是定期更换滤网,但是否更换滤网之前,其除菌除尘效果已经早就不达标了也不得知,此时在关键操作环节置于酒精灯附近操作,是更有保障的。
超净台内的酒精灯是不会影响超净台的层流除菌除尘效果的,酒精灯局部的气流范围本身是无菌无尘的,那些看不见的被酒精灯“赶跑”的细菌灰尘,会进入附近超净台提供的层流里,被排出工作台外。
关于安全问题,酒精灯虽然是明火,正确使用下已经算是很安全的了。不要在酒精瓶身、手套沾有未干的酒精情况下去点灯;不要使酒精灯瓶内的酒精过多或过少;不要使酒精灯倾倒;不要加热易燃易爆炸物品。注意这些细节基本不会有问题,比家庭使用煤气罐安全多了。
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简单来说:
酒精灯提供了明火,
除了一些干燥、高温的独特作用外,
其周围大约10-15cm范围内,
可以形成一个无菌区域,
此范围下方的超净台面,
也不会有灰尘落下。
我一般会把开启的瓶盖放在酒精灯周围大约10cm这个范围内进行保护,一些关键的操作环节,会在此酒精灯附近进行,其余部分和没有酒精灯一样正常
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