细胞冻存注意事项
|
01
冻存液的配置方法：冻存液：10%DMSO + 90%FBS。
但是这个比例各个实验室不一样，10%DMSO一般不怎么变，剩下90%可以根据自己情况调整。我用过10%DMSO + 20%FBS + 70%培养基，也用过10% DMSO + 90%FBS（现在在用），都可以，细胞复苏成活率都90%以上。
02 先配好冻存液，放在4度，等临用前再加。
DMSO在常温下对细胞损伤较大，很多人因此冻细胞时冻一批死一批。
03 最好用程序降温盒，每分钟降一度，效果比按温度梯度放不同冰箱来得好。
把加好的含有细胞的冻存液放到程序降温盒里，再放到-80度冰箱，过夜，第2天取出再放至液氮中。
04 冻存时细胞的密度如何更简单的估算出来？我用两种规格的培养瓶，T25和T75，如果细胞都长满的情况下，可以分别冻存多少管呢？（1.8ml的冻存管）。 这个问题最好细胞计数后再冻存，经验这时候不靠谱，一般1百万/管，1ml/管。1百万就是1x106 cells/mL。 有的细胞，比如MDCK，可以一瓶T25长满90%时冻存1~2管，T75则可以冻存4~6管。
本文来自 医学万用宝公众号，如有侵权请联系！ |
微信公众号下单更便捷
