科研干货 | 一文读懂TEAA如何在核酸分离中大显身手
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前言：目前已有几种基于寡核苷酸的疗法获得了美国食品及药物管理局（FDA）的批准，但由于寡核苷酸的合成和降解途径复杂，涉及复杂的化学修饰，会产生数以百计的杂质，因此，使核酸的分离具有挑战性。而所有治疗用寡核苷酸在进入人体前都必须经过化学修饰，其中一种修饰是硫代磷酸酯（PS）修饰，这种修饰会产生非对映异构体：对于 20 核苷酸长的 PS 寡核苷酸，非对映异构体超过 50 万个。[1] 本文，我们介绍三乙胺乙酸如何助力治疗用寡核苷酸分析，尤其是在核酸定量分析和表征检测中如何发挥作用。 TEAA是什么？
三乙胺乙酸（ Triethylamine Acetate，TEAA ）是一种离子对试剂，本身是疏水性，同时又带正电荷，一方面，TEAA 的疏水基团又与固定相上碳 -18 链的疏水基团发生反应，另一方面，TEAA与核酸主链上的磷酸基团的负电荷反应。
而实现核酸分离是根据其碱基数目、构象、疏水性等特性，如，核酸中的磷酸基团带负电，RNA分子呈亲水性。像TEAA这种离子对试剂，起着连接核酸和柱基质之间的桥梁作用，使核酸吸附在固定相上面，然后，通过改变流动相中乙腈的浓度实现核酸的分离。换而言之，TEAA通过在核酸与柱基质的相互作用，从而分离核酸。
在Europe PMC上报道了一项研究，用TEAA配制HPLC的缓冲液，纯化后，降低了mRNA的免疫反应，产生的mRNA不会诱导IFN和炎性细胞因子，并且，在原代细胞中的翻译水平提高了10 ~ 1,000倍。[2] 其中，缓冲液配制方法如下：
在2022年Analytical Chemistry报道了一项研究，通过开发了一种自动化、高通量的工作流程，用于快速表征大RNA 和 mRNA 治疗药物并直接绘制序列图。其中，mRNA mapping分析中，将RNase T1消化后直接溶解在TEAA中。[3] 随后，使用TEAA配制的缓冲液，进行质谱分析：
03 在2022年Europe PMC上报道了一项研究，目的是开发一种流动相混合物，可以通过质谱法减少寡核苷酸的电荷态和加合物形成的数量，并使用这种流动相混合物来检测mRNA的加帽效率和polyA尾长。通过在流动相A中使用30mMHFIP, 10mm TEAA和1.2 mM TEA和乙醇的混合物，分析polyA尾长和加帽效率，而不需要在消化后进行额外的样品制备。[5]通过使用含有TEAA的流动相，无需在质谱分析前对样品进行脱盐处理，大大减少了样品制备时间和分析所需的 RNA 量。近年来， 随着越来越多的文献报道，TEAA凭借其独特的离子对性质，不仅可用于核酸HPLC的纯度和定量分析，而且在核酸的LC/MS分析上也发挥重要作用，相信未来，TEAA在核酸分离上会有越来越多的应用被科研工作者发现。
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