免疫检测干扰因素的分析、识别和对策
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免疫方法检测中，改变被检物质浓度或改变被检物与相应检测物（可以是：抗原、抗体、配体等）结合能力的物质均可能对检测结果造成干扰。 内源性干扰包括：自身抗体、异嗜性抗体、人抗动物抗体及其他一些结合蛋白等。脂血、交叉反应、一些分析前变异、基质效应甚至检测的设备不同也可对免疫测造成干扰。 这些干扰可引起许多检测结果的假性升高或降低，包括激素、各种标志物、药物和病原微生物的血清学检测等，进而影响临床对疾病的诊断和治疗评估。 试剂开发和技术人员都应充分认识免疫检测中的干扰因素，并在出现结果不符（包括：开发试剂与金标准结果不符、检测结果与临床症状不符）时进行原因分析，查找是否存在干扰因素，并采取相应方案进行验证与确认，以得出正确结果。 No.1 免疫检测干扰的分类 免疫法的特异性与抗体的特性密切相关，同时也受到标本中抗原（抗体）及其基质、试剂成分和免疫检测方法学的影响。 干扰因素 （一）检测物非依赖干扰因素是指一些常见的、对多种物质检测都有干扰的因素，包括：溶血、黄疸、脂血、抗凝物质的影响及样本存储造成的差异，这些干扰因素的特征为干扰的程度与被检测物本身的浓度无明显的关联。 （二）检测物依赖的干扰因素指那些存在于被检标本中的某些成分可与试剂中的1个或多个抗体相互作用或者是检测物相关的自身抗体与检测物相互作用，通过改变被检测物的浓度影响该物质最后的检测结果，如激素结合蛋白、检测物自身抗体等。还包括与检测物结构类似可与检测抗体发生交叉反应的化合物(如：药物及其代谢产物)、异嗜性抗体、HAAA、检测物自身抗体、类风湿因子(RF)以及某些治疗性抗体药物也可通过与检测试剂中的抗体竞争抗原，对检测结果产生干扰。 No.2 免疫检测干扰因素的鉴别 由于各种干扰因素会导致免疫检测的假阳性或假阴性结果，进而引起临床对疾病的误诊误判，甚至错误的治疗，试剂开发和技术人员都必须对免疫检测中的干扰因素给予足够的重视。 当怀疑有干扰因素存在时，可采用下列方案进行鉴别： (1)用标本稀释液将标本按一定比例进行系列稀释后再检测，观察检测物浓度有无线性改变； (2)换用另一物种来源的检测抗体或使用另一种检测方法； (3)标本用不同浓度的阻断剂或者是不同物种来源的混合阻断剂阻断后检测； (4)标本采用上述的各种去除干扰的方案预处理后再检测； (5)直接检测自身抗体或异性抗体是否存在； (6)在标本中加入标准品进行回收试验。 如果这些检测方案最终给出被检测物不同的浓度，表明原检测方案中可能存在着干扰因素。需要注意的是，即使大多数检测系统得到了近似的检测结果，也不能完全排除干扰对检测结果的影响。实际工作中，患者不同的代谢情况，受体结合能力，甚至转录后缺陷等等都可能引起检测结果的不正确。
No.3 减少或消除免疫检测中的干扰 如何减少或消除免疫检测中的干扰因素，是试剂开发和技术人员必须要重视的问题。目前，常用处理干扰因素的方法主要有两方面，即去除干扰抗体或阻断干扰抗体的作用。 （一）采用物理、化学和免疫学方法去除干扰物质 采用凝胶色谱层析法从待检标本中提取被检测物再检测；在琼脂糖珠或A 蛋白上偶联小鼠或其他物种的血清成分，通过免疫吸附去除待检标本中的 HAAA 和异嗜性抗体；用聚乙二醇沉淀也可去除 HAAA 的干扰：对于热稳定的被检测物可加热到70~90℃去除HAAA和异嗜性抗体的干扰。另外，三氟乙酸沉淀法、硫基试剂法、阳离子交换层析等方法均对消除自身抗体的干扰有一定效果。由于大部分的 RF是 IgM 型，β-巯基乙醇可将IgM 五聚体解聚，故RF对免疫检测的干扰可用β-巯基乙醇预处理标本来排除：该方法仅适于各种抗原物质的检测。对于IgG 型的 R可通过A蛋白亲和层析柱对 IgG 的特异吸附来消除。对于一些更难去除的自身抗体，有条件的实验室还可以采用色谱层析法将干扰物质去除。结合试剂盒的实际应用，部分干扰可选择合适的方法通过对样本进行前处理进行解决。 （二）加入相应的阻断剂来阻断干扰抗原抗体反应的干扰物 针对异性抗体，一般采用多种正常动物血清(免疫球蛋白)混合物进行非特异性阻断，可充分吸收异嗜性抗体，从而预防检测干扰。但是由于异嗜性抗体的亲和力和结合力较弱，该方法只能有限地减少免疫干扰。 阻断剂可添加于分析稀释液或在检测前先用阻断剂处理标本。然而，由于不同个体来源的标本中干扰因素造成的干扰程度不一，事实上很难确定一个对所有标本均适合的、较精确的阻断剂用量。 同时，阻断剂对干扰的阻断效果与阻断剂的物种来源及其亚类相关。物种特异性IgG、抗人lgG 或聚合的鼠 IgG、鼠单克隆抗体或是与试剂中抗体物种来源一致的特异性IgG 片段[Fc、Fab、F(ab')2]，都可用于添加到不同的商业试剂盒中作为阻断剂。 几种异嗜性抗体阻断剂、免疫球蛋白抑制剂及一些含阻断剂的试管已有商业化供应。但是，有些情况下商品化免疫试剂中添加的这些阻断剂的阻断效果并不充分，不能完全预防干扰检测的发生。
总而言之，免疫检测中的干扰因素是医学检验结果不确定的重要影响因素之一。尽管我们对免疫检测中干扰因素作用机制有了进一步的认识和理解，但到目前为止，仍然无任何单一的处理方案可以去除所有干扰因素。
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