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RT-PCR 用 SuperScript™ IV 第一链合成系统经过优化，以从纯化 poly(A)+ 或总 RNA 中合成第一链 cDNA。试剂盒包括 SuperScript™ IV 逆转录酶 (RT)，这是一种专有 MMLV 突变体，可在 RT 反应中产生稳健可靠的 cDNA 合成。SuperScript™ IV 合成系统相比基于 SuperScript™ III 的系统在抑制剂耐受性、合成性和反应速度等方面得到了很大提高，同时保留了前代系统的所有优点，包括较高的热稳定性、高效全长 cDNA 合成以及较低的 RNase 活性。在多种样品中存在可导致其他当前可用 RT 效率低下的抑制剂的情况下，SuperScript™ IV 系统仍能提供可靠、一致和快速的 cDNA 合成。 SuperScript™ IV 第一链合成系统包含 RT 反应所需的所有组分，以及一种其它对照基因和相关引物，同时为您提供定制 RT 设置的灵活性，以满足您的应用需求。SuperScript™ IV 合成系统是实现 RT-PCR 应用高性能和灵活性的首选。我们推荐将其用于所有 RT-PCR 应用，尤其是当重现性和可靠性成为主要考虑事项，以及 RNA 样品中的抑制剂可能干扰 cDNA 合成，进而导致基因表达研究出现偏移时，我们推荐使用这款产品。 SuperScript™ IV 第一链合成系统的特性包括： •显著提高了对各种可能干扰 cDNA 合成的抑制剂的耐受性 •能在各类样品中进行可靠、特异的 cDNA 合成 •逆转录酶反应更快，将孵育时间从>50分钟缩短至10分钟 •明显优于 SuperScript™ III RT 的合成性 酶来源 从表达 M-MLV pol 基因的大肠杆菌中纯化获得，经过改良后提高了热稳定性和半衰期、合成性、抑制剂耐受性并降低了 RNase H 活性。 性能和质量测试 脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶及核糖核酸酶分析；cDNA 产物的产率和长度。 单位定义 SuperScript™ IV RT 的一个单位是使用 poly(A) oligo(dT)12-18 作为模板/引物，在37°C条件下10分钟内将1 nmole脱氧核糖核苷酸掺入酸性可沉淀物质所需的酶量。 单位反应条件 50 mM Tris-HCl (pH 8.3)、4 mM MgCl2、10 mM DTT、50 mM KCl、0.5 mM dTTP、0.4 MBq/mL [3H]-dTTP、0.4 mM poly(A) oligo (dT)12-18 以及20 μL酶，在37°C下进行10分钟。 |
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