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Zero Blunt™ TOPO™ PCR 克隆试剂盒可提供用时5分钟的高效一步克隆策略（TOPO™ 克隆），用于将使用校正读码耐热聚合酶扩增的平末端 PCR 产物直接插入至质粒载体。各试剂盒均具有包含用于阳性选择的 ccdB 基因的 Zero Blunt™ TOPO™ 载体（参见图），仅允许含重组体的质粒载体生长。根据您的需要和预算，您可选择含多种感受态细胞或不含感受态细胞的 Zero™ Blunt™ TOPO™ 试剂盒。Zero™ Blunt™ TOPO™ PCR 克隆试剂盒特点： 快速且简便—从 PCR 至克隆仅需3步，手动操作时间短至5分钟 高效—可获得高达 95% 的含正确插入片段的克隆 久经考验—在过去十余年中性能可靠，引用次数超过4,000次 简单 —不需要连接酶、PCR 后程序或含有特异性序列的 PCR 引物。 Zero Blunt™ TOPO™ 克隆试剂盒—概述 载体：pCR™Blunt II-TOPO™ 载体—包含 ccdB 基因，可直接选择重组体 克隆方法：TOPO™ 克隆—使用校正读码耐热聚合酶扩增的平末端 PCR 产物基于拓扑异构酶 I 进行5分钟连接 感受态细胞：多种选择—从包含一般、高效、噬菌体 T1-抗性或快速生长型感受态细胞的试剂盒中选择或使用您的自有细胞。 设计用于校正读码聚合酶的 pCR™Blunt II-TOPO™ 载体— pCR™Blunt II-TOPO™ 载体设计用于克隆由校正读码耐热聚合酶（如 Platinum™ Pfx DNA 聚合酶）生成的平末端 PCR 产物。pCR™Blunt II-TOPO™ 载体包含： •位于 PCR 产物插入位点侧翼的 EcoRI 位点，可方便地切除插入片段 • 大肠杆菌中有卡那霉素和 Zeocin™ 抗性基因供您选择 • 用于体外 RNA 转录和测序的 SP6 启动子/引物位点 • 用于测序或 PCR 筛选的 M13 正向和反向引物位点 pCR™Blunt II-TOPO™ 克隆选择 pCR™-Blunt II-TOPO™ 可通过破坏致死性大肠杆菌基因 (ccdB) 直接选择重组体。载体含有与 LacZα 片段 C 端融合的 ccdB 基因。连接平末端 PCR 产物可破坏 LacZα-ccdB 基因融合的表达，从而在转化时仅允许阳性重组体生长。在平板接种时杀死含非重组载体的细胞。因此，无需进行蓝白斑筛选。 简化的基于 TOPO™ 的克隆 使用 TOPO™ 克隆技术，无需使用含特异性序列的 PCR 引物、PCR 后程序、载体制备或其他耗时长的 DNA 操作步骤。只需将 PCR 反应物直接添加至提供的拓扑异构酶带电载体中，孵育5分钟，并转化大肠杆菌感受态细胞。 高效克隆 携带所需插入片段的克隆高达 95%，您可以筛选更少的克隆体，节省时间和成本。该试剂盒中使用的 pCR™Blunt II-TOPO™ 载体含有致死性 ccdB 基因，用于高效选择由耐热校正聚合酶生成的平末端 PCR 重组产物。 克隆标准 在克隆方面，TOPO™ 克隆技术已作为一种可靠技术供成千上万的科学家使用达十余年。快速、简单易用且高效的 TOPO™ 克隆已在多种应用中应用于多种不同载体。 Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning™ 试剂盒选项 根据您的需求，用于将平末端 PCR 产物直接插入质粒载体的 Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning 试剂盒可与具有不同优势的多种感受态细胞一起购买。 一般克隆：TOP10 细胞（货号号 K2800-20、K2800-40） 高效克隆：TOP10 Electrocomp™ 细胞（货号号 K2860-01、K2860-40） 一般克隆，噬菌体 T1 抗性：DH5α-T1R（货号 K2820-20、K2820-40） 快速增长：Mach1™-T1R 化学感受态大肠杆菌（货号 K2830-20） 自行提供：灵活性高且可节省成本（货号 450254） 我们还提供另一个版本的试剂盒，包括 PureLink™ 快速质粒小提试剂盒（货号 K2800-02），用于分离清洁、已完成测序的重组质粒。 |
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