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说明： Exonuclease I 在 3‘’→5’ 方向上水解单链 DNA，释放 5'-单核苷酸并使末端 5'-二核苷酸保留完好。水解为持续性过程，若 3'末端磷酸化，水解则不能继续。Exonuclease I 可用于测量与目标核酸内切酶反应的共价闭合环状单链 DNA 的内切核苷酸切割。此外，可使用 Exonuclease I 测量 DNA 解旋酶的活性。 为涉及测序或标记方法的应用制备 PCR 产物时，Exonuclease I 的可用性尤其显著。通常，PCR 产物中过多的引物和任何其他的无关单链 DNA 会干扰涉及 DNA 合成的后续酶促反应。Exonuclease I 的水解特性使 PCR 中所有单链 DNA 降解，使该产品在其他应用中更为高效。为实现 dNTP 去磷酸化而与 Shrimp Alkaline Phosphatase (PN 78390) 相结合时，彻底排除使用替代纯化方法（如柱分离、凝胶分离或磁性分离）。 使用 Exonuclease I 进行 PCR 纯化的相关信息，参见 USB ExoSAP-IT 协议。购买 ExoSAP-IT 将获得使用 Exonuclease I 和 SAP 进行 PCR 纯化的方法许可。 特性： 分子量：55 kDa 热灭活：80°C，持续 15 min。 降解为末端二核苷酸。 使糖基化 DNA 降解。 最适温度：37°C 纯度： 经 SDS-PAGE 测定，纯度高于 95%。已检测污染性核酸内切酶、双链核酸外切酶和核糖核酸酶。 储存缓冲液： 20 mM Tris-HCI (pH 7.5)、5 mM 2-巯基乙醇、0.5 mM EDTA 和 50% 甘油。 测定条件： 反应混合物 (100 µL) 包含 67 mM 甘氨酸缓冲液（pH 值 9.5）、10 mM 2-巯基乙醇、6.7 mM MgCl2、0.5 mM 变性 DNA 和酶。孵育在 37°C 下进行，持续 30 min。 单位定义： 一个单位是指催化变性 DNA 释放 10 nmoL 酸溶性核甘酸的酶量（标准条件、30 min 内、37°C 下）。 浓度： 标准浓度：10 个单位/µL，PN 70073 高浓度：20 个单位/µL，PN 72073 功能分析：使用 Sequenase™ Version 2.0 DNA Polymerase 测序试剂盒 (PN 70170) 进行测序反应前，使用 Exonuclease I 处理 PCR 产物，使未掺入的引物降解。 参考文献： GOLDMARK, P. J. AND LINN, S. (1972) J. Biol.Chem.247, 1849-1860. ROSAMOND, J., TELANDER, K. M. AND LINN, S. (1979) J. Biol.Chem.254, 8646-8652. WERLE, E., SCNEIDER C., RENNER, M., VÖLKER, M. AND FIEHN, W. (1994) Nucleic Acids Res.22, 4354-4355. HANKE, M. AND WINK, M. (1994) BioTechniques 17, 858-860. |
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