标记的钙指示剂是结合 Ca2+ 后显示荧光增加的分子。它们可用于多种钙信号传导研究,包括自发荧光水平很高的细胞和组织中 Ca2+ 的测量以及光感受器和光活化螯合剂产生的 Ca2+ 释放的检测。将溶解后的指示剂直接加入含有培养细胞的培养皿中,即可向细胞上样 AM 酯形式的这类钙离子指示剂。通常使用荧光显微镜检测这些细胞的荧光信号。 钙指示剂(AM 酯)规范: •标签(Ca2+– 结合形式的激发/发射波长):Rhod-2 (552/581 nm) • 结合 Ca2+ 后荧光强度增加:>100 倍 •缓冲液中无 Mg2+ 时 Ca2+ 的 Kd:∼570 nM • 结合 Ca2+ 后,荧光增加,波长稍有变化 使用 TPEN 控制重金属阳离子 此外,基于 BAPTA 的指示剂可结合各种重金属阳离子(例如 Mn2+、Zn2+、Pb+2),亲和力远高于 Ca2+。由于存在这些离子而引起的钙测量的扰动可以使用重金属选择性螯合剂 TPEN 进行控制。 钙荧光指示剂的更多选择 我们提供了大量 Molecular Probes™ 钙指示剂,可用于各种实验方案,例如右旋糖酐形式可减少泄漏和区室化、BAPTA 偶联物用于检测高幅钙瞬变。有关更多信息,请查看 Molecular Probes™ 手册中的使用可见光激发的荧光 Ca2+ 指示剂—第 19.3 节。 对于 UV 激发的 Ca2+ 指示剂、基于蛋白的 Ca2+ 指示剂、Ca2+ 指示剂的偶联物以及其他金属离子(即 Mg2+、Zn2+)的荧光指示剂,请查看 Molecular Probes™ 手册中的 Ca2+、Mg2+、Zn2+ 以及其他金属离子指示剂—第 19 章。 |
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