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Thermo Scientific CloneJET PCR 克隆试剂盒也可用于 DH10B 细胞 (K123120)，是一款先进的阳性选择系统，可高效克隆由任何热稳定 DNA 聚合酶生成的 PCR 产物。也可以克隆任何其他的钝性或黏性末端DNA片段。其非常适用于磷酸化或非磷酸化DNA片段。只需 5 分钟即可连接至所包含的阳性分选载体，并产生超过 99% 的重组克隆。将由校正酶生成的平末端 PCR 产物直接接入克隆载体。 在连接前 5 分钟内使用试剂盒提供的热稳定 DNA 平末端化酶将由非校正 DNA 聚合酶或 DNA 聚合酶混合物生成的 PCR 产物处理成平末端。所有常见的实验室大肠杆菌菌株都可以使用连接产物直接进行转化。 特点 CloneJET PCR 克隆试剂盒中包含一种新的即用型阳性选择克隆载体 pJET1.2/blunt。该载体中有一个致命型限制性酶基因，此基因在 DNA 插入片段接入克隆位点后即被破坏。因此，只有含重组质粒的细菌细胞才能形成菌落。不含插入片段的再循环 pJET1.2/blunt 载体分子会表达致死性限制性内切酶，继而在转化后杀死宿主大肠杆菌细胞。此阳性选择大大加快了菌落筛选的进程，节省了蓝白斑筛选所需的额外成本。 为了便于对插入片段进行映射和处理，pJET1.2/blunt 克隆载体的多克隆位点包含两个 BglII 识别序列，位于插入位点两侧。此外，载体含有用于体外和体内转录以及插入片段测序的 T7 启动子。 产品优势 •快速—在仅 5 分钟内完成 PCR 克隆 •较高效率–>99% 阳性克隆 •无克隆背景—阳性选择载体 •多用途—是平末端或黏性末端克隆的理想选择 •经济—无需进行昂贵的蓝白斑筛选 应用 •克隆高达 10 kb 的平末端或 '3-dA 尾 PCR 产物 •克隆限制性内切酶生成的 DNA 片段 •克隆 DNA 测序 •从 T7 启动子体外和体内转录克隆插入片段 包括 •pJET1.2/blunt 克隆载体 • T4 DNA 连接酶 • 2X 反应缓冲液 • DNA 平末端化酶 • pJET1.2 正向测序引物 (5'-CGACTCACTATAGGGAGAGCGGC-3') • pJET1.2 反向测序引物 (5'-AAGAACATCGATTTTCCATGGCAG-3') • 对照 PCR 产物 • 无核酸酶水 •详细方案 电穿孔前，始终使用 GeneJET PCR 纯化试剂盒 #K0701 对连接混合物进行柱纯化或使用氯仿进行提取。混合物中存在蛋白质和盐分会抑制电穿孔。 |
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