pTac-His-MBP-PreScission是碧云天自行研发的一种用于在目的蛋白N端同时融合表达His标签(His tag)和MBP标签(MBP tag)的双标签,并在标签与目的蛋白之前有PreScission酶切位点的原核表达质粒。MBP标签的融合表达有利于提高目的蛋白的表达量和蛋白稳定性,促进蛋白的可溶性和正确折叠;而His标签有利于通过镍柱进行目的蛋白MBP融合蛋白的分离纯化。使用本质粒,在镍柱纯化后获得的含有His和MBP双标签的目的蛋白可以通过PreScission Protease (P2302/P2303)酶切去除His标签和MBP标签。 本质粒含有Tac启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有His和MBP双标签的目的蛋白。 本质粒在MBP标签后含有PreScission Protease识别的八肽序列LEVLFQGP,因此在目的蛋白纯化后可以利用PreScission Protease酶切除去N端的His标签和MBP标签,在理想的情况下剩余目的蛋白的N端还会仅保留两个额外的氨基酸GP (Gly-Pro)。 可采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) (P2210/P2218/P2220)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)或BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型) (P2233)/His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229S)等纯化本质粒表达的目的蛋白融合蛋白,也可以使用His-tag抗体(AH367)检测或少量分离纯化目的蛋白。
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