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碧云天研发的L-乳酸检测试剂盒(WST-8法) (L-Lactate Assay Kit with WST-8)是一种基于WST-8的显色反应，通过比色法快速、高灵敏地对血清或血浆等生物体液、细胞或组织样品以及牛奶的发酵产品等食品中L-乳酸与L-乳酸盐含量进行检测的试剂盒。 乳酸(Lactic acid, LA)，是一种含有羟基的羧酸，化学名为2-羟基丙酸、α-羟基丙酸、丙醇酸，分子式为C3H6O3，分子量为90.08。根据其碳原子不对称性(即手性碳)，乳酸通常以右旋型D-乳酸(D(-)-Lactate)、左旋型L-乳酸(L(+)-Lactate)两种旋光异构体形式存在，两者等比例混合即为消旋的DL-乳酸。 L-乳酸由脑、红细胞、骨骼肌和肠产生，由肝脏、心脏和肾脏代谢，人体产生的乳酸几乎全部为L-乳酸。L-乳酸主要由肝脏从血液中清除，缺氧、酸中毒、供氧和低灌注会损害肝脏对L-乳酸的摄取。血液中的L-乳酸浓度对于重症监护和手术期间患者状况的诊断至关重要。高浓度的L-乳酸能指示肠梗塞，心脏骤停和败血症等疾病，唾液中L-乳酸浓度可作为囊性纤维化的早期诊断指标，L-乳酸也是能量代谢，脑和肿瘤细胞的生物标志物。在食品领域，L-乳酸在发酵过程中被用作质量、新鲜度、风味、稳定性、储存寿命的指示剂[1]。 D-乳酸主要来源于胃肠道细菌和外源性摄入，在组织中的产生量非常低，由于甲基乙二醛(Methylglyoxal, MGO)代谢作用，一般以纳摩尔浓度存在于哺乳动物的血液中[2]，在食品领域，D-乳酸可由乳酸菌产生，存在于许多乳制品饮料和腌制品中，比如酸奶、腌菜、腌肉等。在一些胃肠道疾病中，细菌D-乳酸的产生和从肠道进入血液的吸收会增加，进而导致肠道屏障受损引发炎症[3]。体内D-乳酸的过度积累可能导致潜在的危及生命的D-乳酸酸中毒(D-lactic acidosis or D-lactate encephalopathy)。D-乳酸酸中毒是一种罕见的神经系统综合征，主要发生在短肠综合征患者或空肠-回肠旁路手术后。症状通常出现在摄入高碳水化合物后，吸收不良的碳水化合物由结肠中的异常菌群发酵产生过量的D-乳酸[4]。D-乳酸含量的测定对于监测细菌感染、短肠综合征、败血症等疾病具有重要生理学意义，或可作为肠道屏障完整性的标志[5]。 本试剂盒的检测原理如图1所示。L-乳酸在L-乳酸脱氢酶(L-Lactate dehydrogenase, L-LDH)的作用下氧化生成丙酮酸(Pyruvate)，在这一过程中NAD+还原为NADH；生成的NADH在电子耦合试剂1-mPMS (1-Methoxy-5-methylphenazinium methyl sulfate)的作用下将WST-8还原成橙黄色的Formazan，在450nm左右有最大吸收峰。反应体系中生成的Formazan与样品中L-乳酸含量呈正比。 
图1.碧云天L-乳酸检测试剂盒(WST-8法) (S0208)的检测原理图。 本试剂盒检测灵敏度高，线性范围宽，样品用量少。本试剂盒能特异性检测L-乳酸，而不检测D-乳酸，在样品体积为50μl时可检测含量低至20µM的L-乳酸，在0.02mM-0.5mM (1nmol-25nmol)浓度范围内有良好的线性关系。本试剂盒提供了L-乳酸标准溶液，可以通过设置标准曲线(图2)，从而计算出样品中的L-乳酸含量。如果样品量较少或者样品中L-乳酸的含量较低，可以使用检测灵敏度更高的Amplex Red L-乳酸检测试剂盒(S0227)。如需检测D-乳酸，可以使用碧云天的D-乳酸检测试剂盒(WST-8法) (S0204)。 
图2.碧云天L-乳酸检测试剂盒(WST-8法) (S0208)检测L-乳酸标准品的标准曲线。实际检测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。 本试剂盒提供的检测裂解液有一定的通用性。使用本试剂盒中的BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay裂解获得的细胞或组织样品，也可以用于碧云天生产的其它代谢类试剂盒中同样使用BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay进行裂解的样品检测，通用性强；而且还可用于检测蛋白浓度、进行SDS-PAGE或一些较易溶解蛋白的Western检测。 本试剂盒检测使用灵活，检测速度快，适用范围广。本试剂盒可用于小鼠、大鼠、人等的血清、血浆、尿液等生物体液，细胞培养上清、组织或细胞样品以及牛奶和发酵产品等食品的检测，全程约0.5-1小时即可完成。本试剂盒不仅适合少量样本的检测，也非常适合高通量筛选(High-throughput screening)的自动化操作系统。 用96孔板进行检测时，本试剂盒小包装可以进行100次检测。 包装清单：
-20ºC保存，一年有效。其中WST-8须-20ºC避光保存。 注意事项：本试剂盒仅能检测L-乳酸，不能检测D-乳酸。如需检测D-乳酸，可使用碧云天的D-乳酸检测试剂盒(WST-8法) (S0204)。 BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay、Lactate Assay Buffer需要完全解冻并平衡至室温后再使用，否则会影响检测结果。其它试剂使用时应在冰上进行。 底物从-20ºC拿出在融解过程中可能会有析出，平衡至室温后析出的部分会复溶，不会对检测结果产生影响。 血清、血浆等样品如在4ºC保存，保存时间不得超过2周，否则会影响检测结果的准确性。通常血清样品宜在-20℃或-80℃保存。 为减少稀释液产生的背景带来的误差，样品和标准品的稀释液应该根据样品的种类来定。当样品为细胞或组织的裂解样品时，应使用BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay稀释，当样品为血液等其他样品时，宜使用Lactate Assay Buffer稀释。 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
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